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《這個protocol不好寫》第三章 不就是IHC嗎?我隨手就是1個protoco…
  跟著師妹的步伐走向實驗室,記憶中的一切都鮮活起來,研究生所在的城市位於粵省,和四季分明的老家不一樣,這裡的一年四季總是花團錦簇,萬紫千紅。

  僅僅是王薩三年的研究生生活裡,就認識了許多種色彩豔麗的花。鵬城即便是一年裡最冷的時候也有勒杜鵑裝點,紫色夢幻,玫紅浪漫,整座城市永遠被花兒裝點。現在是十月底,在王薩老家,梧桐大道蕭瑟壯麗,銀杏葉紛紛掉落枝頭,世界宛然是金黃色的,清冷是秋天獨有的高貴。而鵬城的秋卻依然是爭奇鬥妍,大著肚子的異木棉不約而同地競相開放,不同於成熟的紅色,異木棉的顏色是少女獨有的嫩粉。

  如今,異木棉又一樹樹綻放,而王薩卻不是那個感性到會駐足欣賞花開的,被同性鄙視“母0”的正常性取向男青年了。世之奇偉瑰怪,必然真美善,可經歷社會的毒打,王薩不再是那個純真的少年,有限的時間不至於發呆一下午與自然為伴。

  欣賞,要有度。人,要有物質基礎。

  停頓了2秒欣賞實驗樓下五角星形的異木棉花朵,也不去逗樓下血液實驗室師姐養的狸花貓,王薩基本不做停頓地跟隨師妹進了實驗室。

  檢查了一下師妹的蠟塊,人腦膠質瘤的石蠟樣本,表面光滑,組織包埋完整,待會王薩會帶著師妹去切片室,切完片後拷片過夜備用。

  花幾分鍾整理一下師妹的述求:製備IHC染色標本——4um厚度腦膠質瘤FFPE(石蠟切片);確認MOG和FcRn兩類抗體是否能正確染上FFPE。ok,小意思,王薩反手就是一個:

  IHC (破次元壁:需要的讀者自取,自己整理的可能有疏漏...)

  第一天

  1.脫蠟:浸泡於100%二甲苯1,100%二甲苯2各10min

  2.脫水:浸泡於梯度酒精(100%酒精1,100%酒精2;80%酒精,75%酒精)中各10min

  3.脫蠟脫水過程中配置①TBST溶液②抗原修複液③一抗

  ①TBST:900ml純水+100ml 10X TBST+1ml Tween20

  ②1X Citrate PH6抗原修複液:1:100 100XCitrate PH6+100ml純水

  ③一抗:根據抗體手冊或官網信息稀釋為IHC實驗所需濃度,一抗稀釋液:DAKO

  4.清洗:TBST溶液清洗 5min X 3次

  脫蠟脫水和清洗的目的是讓組織充分暴露出來,以便我們的後續操作。

  5.抗原修複:玻片放置器皿中,水浴加熱至95度後,修複20min,後冷卻恢復至室溫

  高溫加熱使組織上的抗原得到修複

  6.清洗:TBST溶液清洗 5min X 3次

  7.加一抗:4°過夜

  第二天

  8.配置DAB顯色液:1mldiluent+30ul DAB concentrate

  9.清洗:TBST溶液清洗 5min X 3次

  10.加二抗:二抗不需要稀釋,孵育1h

  11.清洗:TBST溶液清洗 5min X 3次

  12.顯色:配置好的DAB染色玻片,及時用流水終止染色

  13.複水:浸泡於梯度酒精(75%酒精,80%酒精,100%酒精1,100%酒精2)中各10min

  14.複蠟:浸泡於100%二甲苯1,100%二甲苯2各10min

  15.封片:封片劑提前拿出,使用前離心,氣泡會集中在上層,吸取的時候注意不要吸到氣泡。注意封片劑的體積,風乾。室溫保存即可。

  小手一揮,不到10分鍾就寫出來了,只是。。。王薩突然發現,自己忘記了很多很多東西,這一次,他要把屬於自己的東西就拿到手。。。
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